Préparation
Préparations d’échantillons pour la microscopie électronique
Il existe différents types de préparations. La méthode de préparation des échantillons dépend à la fois de la nature de l’échantillon et du type d’analyse souhaitée. On distingue trois grands types d’analyses :
- La microscopie ultrastructurale consiste à étudier la morphologie d’un échantillon à haute résolution. Il peut s’agir de morphologie globale de surface lors d’une observation en microscopie électronique à balayage, ou de l’observation de l’ultrastructure interne sur coupes en microscopie électronique à transmission
- L’immuno-electron microscopie consiste à faire des immunomarquages sur des échantillons biologiques en utilisant un anticorps primaire comme pour la microscopie photonique suivi d’une sonde secondaire marquée à l’or. Les échantillons marqués peuvent être observés en MET ou en MEB
- Les méthodes analytiques visent à obtenir des données sur la composition des échantillons.(HRTEM, EDX, EFTEM, EELS…etc)
Méthodes de préparation disponibles :
Méthodes conventionnelles de préparation d’échantillon :
- Fixation chimique
- Inclusion en résine (EPON, LR White) conventionnelle ou au Micro-Onde (Pelco BioWave Pro+)
- Ultramicrotomie (coupes semi-fines, ultra-fines, seriées). Leica Ultracut
- Coloration négative (acétate d’uranyle, acide phosphotungstique), et contraste de coupes aux métaux lourds (acétate d’uranyle, citrate de plomb, tétroxyde d’osmium).
- Point critique (CO2 ou HMDS)
- Métallisation
- Amincisseur ionique (à partir d’échantillons polis <10 µm)
En savoir plus : Préparation MET – Préparation MEB
Cryo-préparation d’échantillons :
- inclusion en résine à froid avec l’automate d’inclusion AFS2 Leica
- technique de Tokuyasu, cryocoupes sur échantillons fixés et enrobés dans le sucrose
En savoir plus : Préparation MET
Immunomarquage :
réalisation manuelle d’immunomarquages simple ou double, en pré- et post-embedding, y compris pour la technique de Tokuyasu.
En savoir plus : Préparation Immunomarquage
Conseils aux utilisateurs :
Lors de la conception d’un projet, il est absolument essentiel d’en discuter avec le personnel de la plateforme avant de passer à la réalisation pratique. Dans la plupart des cas, nous pourrons orienter votre stratégie expérimentale en fonction de la nature du projet, des ressources et des compétences disponibles, de la bibliographie et de notre expérience. Si nécessaire, nous saurons vous orienter vers un expert extérieur. Nous ferons toujours de notre mieux pour vous aider à mener à bien votre projet.