Préparation MET

Pour la Microscopie Électronique en Transmission:

Les échantillons doivent être suffisamment minces pour être traversés par le faisceau d’électron. Le type de préparation va dépendre de la nature des échantillons, mais dans tous les cas la taille de l’échantillon sera limitée en épaisseur (20-100nm) et en surface (max 500 µm X 500 µm)

Particules de petite taille (<1 µm) :

L’échantillon peut être déposé directement sur une grille. S’il est naturellement opaque aux électrons (nanoparticules,…) il peut être observé directement. Dans le cas contraire, il doit être contrasté avant observation c’est la technique de coloration négative. C’est le plus souvent le cas pour les échantillons biologiques de petites taille (virus, exosomes, vésicules, organites purifiés…etc). L’agent contrastant utilisé est un élément à numéro atomique élevé qui peut être de l’acétate d’uranyle, de l’acide phosphotungstique, des lantanides…etc

Echantillon de grande taille :

Les échantillons de grande taille doivent être coupés sous formes de sections ultrafines pour pouvoir être observés.

• Matériaux durs :selon leur rigidité et leur degré de dureté, les matériaux peuvent être coupés à l’aide d’un couteau en diamant ou amincis à l’aide d’un l’amincisseur ionique. Les matériaux semi-rigides peuvent être sectionnés à froid en cryo-ultramicrotomie (-15°C à -150 °C).
• Matériaux mous :les matériaux mous doivent être coupés et observés à froid (porte-objet refroidi) ou être inclus en résine. Dans ce dernier cas les méthodes de préparation se rapprochent des techniques utilisées pour les échantillons biologiques.
• Échantillons biologiques :à de rares exceptions près, la plupart des échantillons biologiques doivent être inclus en résine pour pouvoir être sectionnés. Il existe de nombreux types de résine (epoxy, methacrylate, lowicryl…etc). Le principe de préparation suit le même schéma, le protocole sera choisi en fonction de la nature de l’échantillon, du type de structure recherché, du contexte expérimental…etc.